今年4月份,华大智造正式推出MGISEQ-2000RS FluoXpert(以下简称“FluoXpert”)多组学分析仪。这也是中国首款具有自主知识产权、集成了病理切片染拍功能和测序功能的基因测序仪,也是一台能够做病理组织染拍空间蛋白组学的测序仪。为满足医学科研用户在组织切片空间蛋白组学研究中的高标准需求,华大智造全新推出搭配FluoXpert平台使用的24色多重免疫荧光试剂套装,可支持高达23个标记物及细胞核的染色。
在传统病理学和转化医学研究领域,组织切片的蛋白表达分析主要依赖于苏木精-伊红染色(Hematoxylin-eosin staining,H&E)和免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)。然而,H&E染色仅限于提供定性结果,传统IHC染色则无法在单张组织切片上进行多个蛋白表达的检测。
多重免疫荧光技术(Multiplex Immunofluorescence,mIF)打破了这一局限,它能够在一张切片上同时检测多个目标蛋白,保留了宝贵的空间信息,这对于深入理解组织微环境和细胞间相互作用至关重要。多重免疫荧光揭示了不同细胞群之间的空间位置关系,可进一步提升病人的预后评估,对靶向药物的开发、空间标志物的发现有着重要的作用。
FluoXpert基于目标抗原&一抗&荧光二抗特异性结合的生化原理,通过其染色-拍照-洗脱的多轮循环流程,实现了对单张切片的多重目标蛋白检测。其精密的机械设计、先进的流体控制系统、独特的生化工艺和高效的光路系统共同确保了检测的高灵敏度和组织切片多重标记物空间定位的准确性。
FluoXpert染色试剂盒上新
实现高达20+靶标蛋白染色
此次升级的24色多重免疫荧光试剂套装——FluoXpert多重免疫荧光试剂套装(SS 24P/SL 24P/DL 24P),套装同样可选择性搭配三种不同型号的载片(SS/SL/DL),支持高达23个标记物及细胞核的染色。该试剂套装简单易用,可支持FFPE石蜡切片和新鲜冷冻FF切片,兼容市售一抗,用户无需对一抗进行特殊的偶联处理,稀释后加入试剂盒中即可上机进行全自动的多重染色,24色染色流程可在12小时内完成,极大地简化实验手动操作流程,提高科研效率。
不同于传统的多重免疫荧光技术(Tyramide signal amplification,TSA),FluoXpert试剂盒每次可进行两种蛋白的染色,抗体上所带的荧光信号串扰少,信号更准确。而TSA方式针对不同目标蛋白需要用不同的荧光基团进行信号标记,多重染色后切片上同时存在多种荧光染料(如图1.1),后期需要通过光谱拆分还原不同的荧光信号,颜色越多,光谱拆分难度越大。使用FluoXpert可以有效避免TSA方法带来的光谱串扰问题(图1.2),轻松达到20+目标蛋白的染色效果。
图1.1:基于TSA的mIHC染色原理,9色多重免疫荧光谱图
图1.2:FluoXpert多重免疫荧光使用的双荧光通道
四大黑科技集聚
FluoXpert 24-plex试剂盒
01.集成高效自发荧光去除试剂,有效去除组织切片的自发荧光信号;图2(a-b)
02.载片镀层处理,金属镀层使激光进行二次反射,激发效率加倍;图2(c)
03.抗体增强剂,有效提高抗体结合效率,进而节省一抗用量及孵育时间
04.高效温和的洗脱技术,多达19轮循环染色,信号强度波动小于7%,图3
图2.(a-b)鼠脑石蜡切片在试剂盒自发荧光试剂作用下,组织本身自发荧光可降低3-5倍;(c)载片镀层作用下使激发效率增强~150%
同一切片经过19轮染色结果表明多轮染色信号稳定,且可精准实现多轮的图像对齐
图3.同一切片经过19个循环染色后同一标记物信号波动小于7%
不同样本类型验证
FluoXpert实测数据高效可靠
1.样本类型:扁桃体石蜡切片
染色重数:22重标记物+核染色
研究领域:抗体Panel开发
测评机构:Dr.Joe Yeong(新加坡)
实测结论:FluoXpert平台可实现20+蛋白的染色,各marker间信号串扰少,可精确揭示不同细胞群体的空间分布,为空间蛋白组学研究提供高效可靠的技术平台。
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2.样本类型:食管癌石蜡切片
染色重数:9重标记物+核染色
研究领域:肿瘤免疫
测评机构:华南某用户
实测结论:FluoXpert的mIF染拍功能可与单细胞测序、时空组学结合,实现基因及蛋白层面的多组学分析,为肿瘤免疫微环境深入研究提供新思路。
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3.样本类型:食管癌石蜡切片
染色重数:15重标记物+核染色
研究领域:抗体开发
测评机构:西南某用户
实测结论:FluoXpert多重免疫荧光自动染拍功能为抗体开发提供了高效验证工具。
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4.样本类型:人子宫内膜冷冻切片
染色重数:13重标记物+核染色
研究领域:妊娠过程分子机制研究
测评机构:华南某用户
实测结论:结果表明FluoXpert的多重免疫荧光染拍功能在冷冻切片上表现优异,抗体染色特异性较高,细胞定位准确,成像效果好,能很好的实现多种蛋白表达的共定位分析。
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5.样本类型:植物愈伤组织石蜡切片
染色重数:4重标记物+核染色
研究领域:植物再生的机制研究
测评机构:华东某用户
实测结论:FluoXpert样本兼容性高,且一抗无需特殊偶联处理,使得我们的植物样本多重蛋白染色在FluoXpert平台得以实现,为植物再生的机制研究扩宽思路。
实测样本全图预览
来源:华大智造MGI